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Source text - English To prepare the vaccine, melanoma cells are irradiated and transduced with rAAV vectors as vehicle for the therapeutic genes B7.2 and GM-CSF. After further cell cultivation, the cells are trypsinized, washed, frozen, thawed, and finally injected into a patient.
Given a patient dose of 107 vaccine cells, at maximum 106 transducing rAAV particles and 103 rcAAV particles are injected into a patient. Replication and biodistribution of rAAV is only possible if the same cell is coinfected with at least one rAAV, one rcAAV and one helper virus particle. Given the number of particles above, the chance for such an event is very unlikely. Nevertheless, if a cell was infected by all 3 types of viruses, a preferential replication of rcAAV would occur, because rcAAV as close-to wild type variant has a clear selection advantage over rAAV. Finally, recombination between rcAAV and rAAV, leading to a replication-competent recombinant virus harboring the foreign (therapeutic) genes can never occur, because the genome of such a fictitious particle would be much larger than the well defined packaging capacity of AAV particles (approx. 5 kb at maximum).
Beside the fact that AAV can only replicate in the presence of helper viruses, it is important to mention that AAV is a non-pathogenic virus and, therefore, a very safe vector system. Furthermore, around 70-80 % of the human population is seropositive for AAV-2, the serotype used for generation of our recombinant vectors. Because AAV-2 persists in a latent state via specific integration into human chromosome 19, it is very likely that most humans are carrier for AAV genomes. However until now, there is no systematic investigation with regard to the natural biodistribution of AAV in man. Furthermore, patients with acute infections of HSV or Ad will be excluded from the study to minimize the risk of rAAV replications in vivo.
Translation - Spanish Para preparar la vacuna, las células del melanoma son irradiadas y transducidas con vectores rAAV como transportadores de los genes terapéuticos B7.2 y GM-CSF. Después del cultivo celular adicional, las células son tripsinizadas, lavadas, congeladas, descongeladas, y finalmente inyectadas al paciente.
Cuando a un paciente se le administra una dosis de 107 células vacunantes, a éste se le inyecta un máximo de 106 partículas transductoras rAAV y 103 de partículas rcAAV. La replicación y biodistribución del rAAV sólo es posible si la misma célula está coinfectada con al menos un rAAV, un rcAAV y una partícula de virus auxiliar. Considerando el número de partículas anterior, la posibilidad de dicho evento es bastante improbable. Sin embargo, si una célula fuera infectada por los 3 tipos de virus, ocurriría una replicación preferencial del rcAAV, debido a que el rcAAV, como variante cercano de la cepa natural, posee una clara ventaja de selección sobre el rAAV. Finalmente, la recombinación entre rcAAV y rAAV, que conduce a una replicación competente del virus recombinante que albergan los genes foráneos (terapeúticos), nunca puede ocurrir, ya que el genoma de dicha partícula ficticia sería mucho más grande que la bien definida capacidad de empaquetamiento de las partículas de AAV (aprox. 5kb como máximo).
Además del hecho que el AAV sólo se puede replicar en presencia de virus auxiliares, es importante mencionar que el AAV es un virus no-patogénico, y por lo tanto, un sistema vectorial muy seguro. Aún más, cerca de un 70-80% de la población humana es seropositiva para el AAV-2, el serotipo utilizado para la generación de nuestros vectores recombinantes. Ya que el AAV-2 persiste en un estado latente mediante la integración específica al cromosoma humano 19, es muy probable que la mayoría de los humanos sean portadores de genomas AAV. Sin embargo, hasta este momento, no existe una investigación sistemática en lo que se refiere a la biodistribución natural del AAV en el hombre. Además, los pacientes con infecciones agudas por HSV o Ad (Alzheimer) serán excluidos del estudio para minimizar el riesgo de replicaciones del AAV in vivo.
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